大乳粒檢測方法及各國藥典的規(guī)定

【中國藥典2010版】

  目前中國藥典對于乳劑中乳粒粒徑的檢測僅使用光散射法測試平均粒徑。 要求：平均粒徑< 0.4微米。

【中國藥典2015公式稿】

丙泊酚注射用脂肪乳：

   大乳粒照粒度和粒度分布測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅸ E 第三法）檢查，平均粒徑應(yīng)為0.18～0.27μm，90％累計(jì)粒徑不得過0.4μm；大于1μm的乳粒數(shù)不得過2%，并不得檢出大于3μm的乳粒。

脂肪乳注射液(C14～24)

   大乳粒粒度和粒度分布測定法（中國藥典2010版二部附錄ⅨE第三法）或照動態(tài)光散射法檢查，體積平均粒徑或光強(qiáng)平均粒徑不得過0.50μm；另取本品，照基于單粒子光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法測定，大于5μm的乳粒加權(quán)總體積不得過油相體積的0.05％。

中/長鏈脂肪乳注射液

   大乳粒照粒度和粒度分布測定法（中國藥典2010版二部附錄ⅨE第三法）或照動態(tài)光散射法檢查，體積平均粒徑或光強(qiáng)平均粒徑不得過0.50μm；另取本品，照基于單粒子光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法測定，大于5μm的乳粒加權(quán)總體積不得過油相（大豆油與中鏈甘油三酸酯）體積的0.05％。

【美國藥典】< USP36 > Chapter 729

   美國藥典對于乳劑中乳粒粒徑的檢測有方法一動態(tài)光散射法，方法二光阻法。 方法I:動態(tài)光散射法，要求：平均粒徑0.5微米 方法II：光阻法，大于5微米的乳粒(PFAT5)體積占比0.05%。

USP729起源：

   美國曾發(fā)生過注射脂肪乳大粒子引起的醫(yī)療事故，這也是促成美國藥典委員會對大粒子關(guān)注的起因。1994年，美國FDA（美國食品藥物管理局）宣布，有兩例因注射了腸外營養(yǎng)脂肪乳（簡稱“TNP“）而引起的死亡案例，直至1996年經(jīng)過詳細(xì)的病因調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNP營養(yǎng)混合液中外加的有機(jī)鈣和無機(jī)磷酸（CaHPO4）顆粒粒徑過大而堵塞了人體血管，終導(dǎo)致病人死亡。（人體微血管徑: 4–9μm，細(xì)動脈管徑：20μm。）

   經(jīng)過數(shù)據(jù)研究和佐證，Dr. DAVID F. DRISCOLL發(fā)表了數(shù)據(jù)證明了這是因?yàn)槿閯┲写嬖诖笥?微米的乳粒引起的。而且探索了如何檢測大于5微米乳粒（英文簡寫為PFAT5）的方法。

注射脂肪乳中大顆粒的危害

   1)注射脂肪乳中的大顆粒會伴隨著注射過程進(jìn)入人體肺部，造成肺部形成肉芽腫；

   2)大顆粒進(jìn)入血管可以引起血管肉芽腫、靜脈炎及血栓等；

   3)大顆粒伴隨血液循環(huán)可進(jìn)入到身體的其他器官，如肝、腎等都有損害；

   4)大顆粒的存在會影響注射液本身的穩(wěn)定性。

USP729的變遷

2004年10月

   由美國藥典發(fā)布了USP<729> Vol. 30(6) ： Globule Size Distribution in Lipid Injectable Emulsions. 在的USP<729>章節(jié)里公布了注射脂肪乳的粒度測試要求。

   方法一：采用動態(tài)光散射或者米氏散射原理測試脂肪乳平均粒徑(MDD)，規(guī)定強(qiáng)度徑 Int-Weight:

   方法二：采用光阻法(Light Obscuration)測得PFAT5值：統(tǒng)計(jì)1.8μm-50μm的脂肪乳顆粒體積在油相體積中的比例。測試時(shí)間為120s,180s,240s，其中每個(gè)時(shí)段測試三次。PFAT5值不得超過0.05%。

2007年11月

   美國藥典USP<729>30 - NF25在方法一中做了變動，不限測試油相的濃度，平均強(qiáng)度粒徑INT-Weight MDD值小于0.5μm或者500nm。

2010年

   美國藥典USP<729>34-NF29 既USP30版改動后，在方法二中將測試時(shí)間改為一個(gè)測試的因素，延長測試時(shí)間，運(yùn)行兩次樣品，PFAT5值均不得超過0.05%。

2013年11月

   美國藥典USP<729>36-NF 基本與36版一致。

USP729的內(nèi)容

    在USP729中對注射脂肪乳中乳滴粒度分布做了明確的規(guī)定，顆粒粒度分布的兩個(gè)主要因素：顆粒平均粒徑和大顆粒尾部分布必須限制在規(guī)定的范圍內(nèi)。 檢測項(xiàng) I: 脂肪乳乳滴平均粒徑分布(動態(tài)光散射原理) 0.5μm 檢測項(xiàng)II: 脂肪乳尾端大于5μm的乳滴（PFAT5）占油相體積比例(光阻法)0.05% 。

       右圖表示了動態(tài)光散射法只能測出樣品的平均粒徑，但是對于“尾部”PFAT5來說，其所占的比例極低，普通的光散射方法不能檢測出，所以使用光阻法來檢測PFAT5 值。

中國乳劑行業(yè)對粒徑的關(guān)注

1.中國藥典委員會很早就對脂肪乳的大粒子進(jìn)行了研究。

2.中國仿制藥一致性評價(jià)工作已經(jīng)開展，2015年會啟動注射劑的評價(jià)工作。

3.國內(nèi)企業(yè)和藥典委員會已經(jīng)對某些品種進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，如丙泊酚乳劑注射液。

4.藥典公式稿關(guān)于提高脂肪乳的標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)結(jié)束公示，即將進(jìn)入藥典。

常見問題與解答

       Q1、PFAT 5是計(jì)算體積還是數(shù)量比例的？

答：PFAT5——美國藥典對乳劑大顆粒尾部(Large- Diameter Tail)分布規(guī)定,指待測樣品的粒徑值(X)在5 μm＜X＜50 μm的體積占所測樣品油相體積的百分比，其數(shù)值小于0.05%屬于合格。 AccuSizer 780系列產(chǎn)品的操作軟件中有Volume Fraction calculation計(jì)算模塊，此模塊符合方法II的規(guī)范。

根據(jù)上述計(jì)算模塊中的統(tǒng)計(jì)，此樣品的PFAT5值是0.013%， 符合美國藥典要求的合格之。

Q2、PFAT 5的計(jì)算方法？

答：注射脂肪乳尾部大顆粒（Large-Diameter Tail）分布規(guī)定，其待測樣品中顆粒的粒徑 (X)在5 um＜ X ＜50 um之間的體積占所測油相總體積百分比要小于0.05%。

Q3、為什么要探究PFAT5值？

答：超過PFAT5限度值的乳劑會危害人體健康，甚至造成死亡。另外，F(xiàn)PAT5是影響脂肪乳穩(wěn)定性的一個(gè)重要指標(biāo)。

Q4、測試樣品時(shí)間的取定？

    答：經(jīng)過試驗(yàn)和數(shù)據(jù)表明，一般情況下，120秒是比較合適的測試時(shí)間。在此測試時(shí)間內(nèi)，基本上所得的數(shù)據(jù)是穩(wěn)定有效的。如果不確定，可以延長測試時(shí)間（比如180秒），如果延長測試時(shí)間和在120秒得出的結(jié)果一致，基本可以判定120秒是合適的檢測時(shí)間。